基本介紹

酵母展示技術（Yeast Display）是一種廣泛應用于抗體篩選、蛋白工程及配體篩選的體外分子進化技術。該技術利用釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）或畢赤酵母（Pichia pastoris）等真核細胞，將外源蛋白或多肽融合至酵母細胞表面展示蛋白（如 Aga2p），從而實現目標分子在酵母細胞表面的穩定表達。與噬菌體展示相比，酵母展示具備真核翻譯后修飾能力，能夠更好地保留蛋白的天然構象和功能。該技術最早由 K.D. Wittrup 于 1997 年提出，目前已廣泛應用于抗體發現、蛋白優化以及新型生物分子的篩選等領域。

基本原理

酵母展示技術的核心原理是通過基因工程手段，將目標蛋白或多肽的編碼序列與酵母展示蛋白基因（如 Aga2p）融合，使得目標分子在酵母細胞表面展示。由于酵母是真核生物，其翻譯后修飾（如糖基化、二硫鍵形成）更加接近哺乳動物細胞，從而有助于提高篩選分子的功能和穩定性。在構建了高多樣性的酵母展示文庫后，通過熒光激活細胞分選技術（FACS），可以快速篩選出高親和力、高特異性的結合分子。這種技術在抗體發現、蛋白互作研究以及新型藥物開發等方面具有重要價值。

核心流程

1.文庫構建：將目標蛋白（如抗體可變區 VHH、隨機肽庫）基因克隆至酵母展示載體（如 pYD1），通過電轉化或化學轉化將其導入酵母細胞。

2.展示與表達：誘導酵母細胞表達展示蛋白，使目標分子通過與 Aga2p 融合穩定錨定在酵母表面。

3.親和篩選（FACS）：利用熒光標記的靶標抗原，通過流式細胞術（FACS）篩選高親和力結合分子，去除非特異性結合子。

4.擴增與優化：回收陽性酵母克隆，進行多輪篩選（通常 3~5 輪）以提高親和力，并可結合突變文庫優化結合性能。

5.下游應用：獲得的高親和力分子可進一步進行抗體工程化、蛋白表達及功能驗證，如 ELISA、Western blot、SPR、細胞實驗等。

技術優勢

1.真核系統表達：與噬菌體展示相比，酵母展示保留了蛋白的天然折疊和翻譯后修飾，提高蛋白功能的穩定性和篩選成功率。

2.高通量篩選：結合流式細胞分選（FACS）技術，實現單細胞水平的高靈敏度篩選，極大提高篩選效率。

3.大規模文庫構建：自制高效感受態酵母細胞，一次轉化可獲得 108 級別的文庫庫容，滿足大規模篩選需求。

4.快速親和力成熟：可通過定向突變、隨機突變等手段優化抗體或蛋白，提高親和力、穩定性及特異性。

5.豐富的項目經驗：團隊具備多種目標蛋白的篩選經驗，包括抗體發現、蛋白互作篩選、酶優化、受體-配體篩選等，可滿足不同項目需求。

案例

1.CLDN6 抗體的篩選

2.DDR1 納米抗體的篩選

3.RIFIN天然抗體的進化